（1）實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介

細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色 (Senescence β-Galactosidase Staining Kit)是一種基于衰老時(shí)衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase; SA-β-Gal)活性水平上調(diào)而對(duì)衰老細(xì)胞或組織進(jìn)行染色檢測(cè)。在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以觀測(cè)到細(xì)胞或組織的衰老情況。絕大多數(shù)正常細(xì)胞被認(rèn)為僅有有限的分裂能力，在不能分裂后就進(jìn)入衰老(senescence)狀態(tài)。此時(shí)細(xì)胞仍然是存活的，但細(xì)胞的基因和蛋白的表達(dá)譜發(fā)生了很大改變。衰老的細(xì)胞不能在一些常規(guī)的刺激下再誘導(dǎo)細(xì)胞分裂，并且衰老細(xì)胞的細(xì)胞周期分布也比較特殊，不同于一些損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞休眠，也不同于細(xì)胞生長(zhǎng)接觸抑制的情況。衰老細(xì)胞通常體積變大，并表達(dá)在pH6.0時(shí)有高酶活性的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)。細(xì)胞衰老也被認(rèn)為是生物體抑制腫瘤的一種方式，同時(shí)也是生物體老化(aging)的一種潛在原因。

（2）實(shí)驗(yàn)流程

① 對(duì)于6孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞，吸除細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS或HBSS洗滌1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15分鐘。對(duì)于其它類型的培養(yǎng)板，固定液及后續(xù)溶液的用量參照此比例進(jìn)行操作。

② 吸除細(xì)胞固定液，用PBS或HBSS洗滌細(xì)胞3次，每次3分鐘。

③ 吸除PBS或HBSS，每孔加入1毫升染色工作液。

④ 37℃孵育過夜，可以用parafilm或保鮮膜封住6孔板防止蒸發(fā)。注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行。

⑤ 普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時(shí)觀察計(jì)數(shù)，可以去除染色工作液，加入2毫升PBS，4℃可以保存數(shù)天；或者加上封片液封片后，4℃可以保存較長(zhǎng)時(shí)間。