（1）實驗簡介

干細胞（stemcell）是一類具有自我復(fù)制能力（self-renewing）的多潛能細胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細胞，如成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞等。本公司優(yōu)化了誘導(dǎo)培養(yǎng)基及誘導(dǎo)條件（已申請專利），干細胞的分化效率大幅提高。

（2）實驗流程

① 茜素紅染色檢測成骨分化：取細胞進行誘導(dǎo)，待細胞達到80~90%融合時，進行胰酶消化并制成細胞懸液。將細胞接種于6孔板中，每孔中加入2ml L-DMEM培養(yǎng)液，并置于37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)；待細胞達到80~90%融合時，去培養(yǎng)液，每孔中加入2ml成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液，然后置于37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)。每3天換液，誘導(dǎo)培養(yǎng)4~5周；誘導(dǎo)培養(yǎng)后，吸去培養(yǎng)液，加入PBS進行漂洗；加入70％乙醇室溫固定1小時；PBS漂洗1次，加入約1ml茜素紅，搖晃使其全面覆蓋孔底，室溫染色10 min；吸去染液，去離子水洗5次；顯微鏡下觀察，拍照。

② 油紅O染色檢測成脂分化：取細胞進行誘導(dǎo)，待細胞完全融合后，吸去培養(yǎng)液，每孔中加入2ml成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)液進行誘導(dǎo)。誘導(dǎo)培養(yǎng)7-10天；進行油紅O染色。吸去培養(yǎng)液，加入PBS進行漂洗。每孔中加入2ml 10%中性甲醛固定30 min。60%異丙醇沖洗3s后每孔中加入約1ml油紅O工作液，搖晃使其全面覆蓋孔底，染色15min。吸去染液，加入60%異丙醇洗去多余染液，蘇木素復(fù)染細胞核5s，、PBS漂洗3遍，甘油封片；顯微鏡下觀察，拍照。

③ 甲苯胺藍染色檢測成軟骨分化：細胞胰酶消化后轉(zhuǎn)移到離心管中進行軟骨分化誘導(dǎo)。平均每管細胞數(shù)量為2×105，每3天換軟骨誘導(dǎo)液1次，如此進行3周；中性甲醛固定后，進行石蠟包埋并切片；石蠟切片于60℃烘箱中進行脫蠟后置于二甲苯中浸泡15min，重新更換二甲苯浸泡10 min，然后按照乙醇梯度依次將石蠟切片置于其中：無水乙醇(5min)--無水乙醇(5 min)--95%乙醇(5min)--80%乙醇(5 min)--70%乙醇(5min)--50%乙醇(5 min)--蒸餾水(5min)；蒸餾水沖洗后，將石蠟切片置于0.5%甲苯胺藍染色液（50-60℃）中浸染15min，然后用蒸餾水終止其反應(yīng)；用95%乙醇分化10s，顯微鏡下觀察其染色程度并拍照。