（1）實(shí)驗(yàn)簡介

實(shí)時(shí)PCR（real-time PCR），屬于定量PCR（Q-PCR）的一種，以時(shí)間內(nèi)DNA的增幅量為基礎(chǔ)進(jìn)行DNA的定量分析。定量方式包括絕對(duì)定量和相對(duì)定量。實(shí)驗(yàn)通過以熒光染料(SYBR

Green)或熒光標(biāo)記的特異性的探針，對(duì)DNA進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，檢測(cè)待測(cè)樣本中mRNA、miRNA、lncRNA在DNA水平的基因拷貝數(shù)變化。

（2）實(shí)驗(yàn)流程

① 待測(cè)樣本提供：組織、細(xì)胞、全血及其它，干冰或低溫運(yùn)輸。

② 總RNA抽提，測(cè)定RNA濃度，并取一定量RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

③ 引物設(shè)計(jì)及合成。

④ 熒光定量PCR：SYBR

Green摻入法或Taqman探針法進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR。

⑤ 實(shí)驗(yàn)完畢，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括實(shí)驗(yàn)方法與步驟、引物信息、擴(kuò)增曲線、數(shù)據(jù)分析。

（3）注意事項(xiàng)

① 本實(shí)驗(yàn)通常是以RNA為模板，如果需提取DNA模板，請(qǐng)注明。

② 細(xì)胞樣本可以寄送培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)瓶用無血清培養(yǎng)基充滿，保證細(xì)胞無污染。

③ 提供詳細(xì)的待測(cè)基因信息，客戶也可以提供引物或引物序列。