（1）實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介

焦磷酸測(cè)序可在一次檢測(cè)中快速定量一個(gè)或多個(gè)甲基化位點(diǎn)，是目前最理想的驗(yàn)證方法。因此該技術(shù)在表觀遺傳學(xué)研究中逐漸成為數(shù)據(jù)分析的金標(biāo)準(zhǔn)。本公司基于QIAGEN公司的PyroMark Q96 ID平臺(tái)，應(yīng)用焦磷酸測(cè)序（Pyrosequencing）技術(shù)，不僅解決了常規(guī)的焦磷酸測(cè)序法在非CpG位點(diǎn)胞嘧啶轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶時(shí)影響到引物的結(jié)合，進(jìn)一步提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性；能提供基于序列測(cè)定SNP檢測(cè)、等位基因頻率分析、甲基化檢測(cè)、雜合子缺失及細(xì)菌、病毒分型等技術(shù)服務(wù)。

（2）實(shí)驗(yàn)流程

① DNA提取及純化

② 亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化

③ PCR擴(kuò)增

④ 焦硫酸測(cè)序

⑤ 甲基化定量

⑥ 實(shí)驗(yàn)完畢，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括實(shí)驗(yàn)方法與步驟、數(shù)據(jù)分析、實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

（3）技術(shù)優(yōu)勢(shì)：

① 先進(jìn)的算法設(shè)計(jì)可優(yōu)化最佳的實(shí)驗(yàn)條件，內(nèi)嵌式的質(zhì)控保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠，全程的軟件控制減少人為因素的影響；

② 靈敏度高，可測(cè)到鄰近CpG區(qū)域的單個(gè)甲基化水平，甚至包括測(cè)序的引物區(qū)域；

③ 周期短、通量高，1h內(nèi)可同時(shí)平行分析96個(gè)樣本，一次運(yùn)行可實(shí)現(xiàn)多個(gè)連續(xù)CpG位點(diǎn)定量分析；

④ 除常規(guī)的檢測(cè)位點(diǎn)變化情況外，還可準(zhǔn)確計(jì)算頻率變化；

⑤ 對(duì)于檢測(cè)位點(diǎn)要求低，可檢測(cè)未知序列信息，覆蓋到人類基因組的所有CpG位點(diǎn)；

⑥ 對(duì)于樣品要求低，適用于新鮮、冷凍和FFPE樣本；