（1）實(shí)驗(yàn)簡介

免疫印跡（Immunoblotting）又稱蛋白質(zhì)印跡（Western blotting），是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有

SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。結(jié)合化學(xué)發(fā)光檢測，可以同時(shí)比較多個樣品同種蛋白的表達(dá)量差異。

（2）實(shí)驗(yàn)流程

① 提取新鮮冰凍組織或細(xì)胞的總蛋白。用紫外分光光度儀測定其OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定蛋白濃度，計(jì)算上樣蛋白量。

② 12%SDS-PAGE電泳分離，然后將蛋白轉(zhuǎn)印到PVDF膜上。

③ 用5%脫脂奶粉封閉1h。

④ 加入一抗，4℃孵育過夜。

⑤ 與二抗工作液（Sigma公司，美國）室溫孵育1h，ECL顯色。